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產(chǎn)品簡介： Hoechst 33342，也稱 bisBenzimide H 33342 或 HOE 33342，是一種可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光 染料，對細(xì)胞的毒性較低。Hoechst 33342 染色常用于細(xì)胞凋亡檢測，染色后用熒光顯微鏡觀察或流 式細(xì)胞儀檢測。Hoechst 33342 也常用于普通的細(xì)胞核染色，或常規(guī)的 DNA 染色。Hoechst 33342 的 最大激發(fā)波長為 346nm，最大發(fā)射波長為 460nm；Hoechst 33342 和雙鏈 DNA 結(jié)合后，最大激發(fā)波 長為 350nm，最大發(fā)射波長為 461nm。本 Hoechst 33342 染色液可直接用于固定細(xì)胞或組織的細(xì)胞 核染色，也可直接用于活細(xì)胞或組織的細(xì)胞核染色。 

使用說明： 使用前用生理鹽水或 PBS 將 Hoechst 33342 染色液稀釋 100 倍，即為工作液。 

1. 對于固定的細(xì)胞或組織： 

a. 對于細(xì)胞或組織樣品，固定后，適當(dāng)洗滌去除固定劑。隨后如果需要進(jìn)行免疫熒光染色，則先進(jìn)行免疫熒光染色，染色完畢后再按后續(xù)步驟進(jìn)行 Hoechst 33342 染色。如果不需要進(jìn)行其它染色，則直接進(jìn)行后續(xù)的 Hoechst 33342 染色。 

b. 對于貼壁細(xì)胞或組織切片，加入少量 Hoechst 33342 工作液，覆蓋住樣品即可；對于懸浮細(xì)胞，至少加入待染色樣品 3 倍體積的工作液，混勻。室溫放置 3-5 分鐘。 

c. 吸除 Hoechst 33342 染色液，用 TBST、PBS 或生理鹽水洗滌 2-3 次，每次 3-5 分鐘。 

d. 直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。細(xì)胞發(fā)生凋亡時，會看到凋亡細(xì)胞的 細(xì)胞核呈致密濃染，或呈碎塊狀致密濃染。 

2. 對于活細(xì)胞或組織： 

a. 加入適當(dāng)量 Hoechst 33342 工作液，必須充分覆蓋住待染色的樣品，通常對于六孔板一個孔需加入 1mL 工作液，對于 96 孔板一個孔需加入 100μL 工作液。 

b. 在適宜于細(xì)胞培養(yǎng)的溫度下培養(yǎng) 20-30 分鐘。棄染色液，用 PBS 或培養(yǎng)液洗滌 2-3 次即可進(jìn)行熒光檢測。

注意事項： 

熒光染料都存在淬滅的問題，為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光衰減封片劑。

建議染色后盡量 當(dāng)天完成檢測，活細(xì)胞或組織染色后應(yīng)立即觀察。 

為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。