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儲(chǔ)存條件 4℃保存，一年有效（避免冷凍）。

產(chǎn)品介紹 

     LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 是一種非 常高效的新型轉(zhuǎn)染試劑，細(xì)胞毒性更低，轉(zhuǎn)染效果更佳，達(dá)到了國際最主流轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染效果。適用于把質(zhì)粒、 siRNA 或其它形式的核酸包括 DNA、RNA、寡核苷酸轉(zhuǎn)染 到真核細(xì)胞中。

     LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 對(duì)于常見的 哺乳動(dòng)物細(xì)胞具有非常高的轉(zhuǎn)染效率、重復(fù)性好、操作簡(jiǎn)單、 無明顯的細(xì)胞毒性，并且對(duì)于貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞都適用。

     LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 轉(zhuǎn)染試劑的 使用方法和常用的 Lipofectamine?2000 Reagent 完全一致， 轉(zhuǎn)染效率比 Lipofectamine? 2000 Reagent 更高。

     LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 轉(zhuǎn)染試劑不 僅適用于質(zhì)粒、siRNA 等單一成分的細(xì)胞轉(zhuǎn)染，也適合多個(gè) 質(zhì)?；蛘哔|(zhì)粒與 siRNA 等的組合轉(zhuǎn)染。

     LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn) 染過表達(dá)質(zhì)粒后，通常 24-48 h 后達(dá)到較高的蛋白表達(dá)水平， 并且很多情況下蛋白表達(dá)量在轉(zhuǎn)染后 48 h 顯著高于轉(zhuǎn)染后 24 h；轉(zhuǎn)染 siRNA 通常 3-5 天后對(duì)于目的基因的下調(diào)水平會(huì) 比較理想。

     LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn) 染細(xì)胞時(shí)，基本不受細(xì)胞培養(yǎng)液中血清影響，即可以在血清存在的情況下進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染。但為了取得最佳的轉(zhuǎn)染效果， 推薦轉(zhuǎn)染時(shí)使用不含抗生素培養(yǎng)液。轉(zhuǎn)染后不必去除轉(zhuǎn)染液， 或者改變或添加培養(yǎng)基，但轉(zhuǎn)染 4-6 h 后可去除轉(zhuǎn)染液。

使用方法

     1. DNA 轉(zhuǎn)染 下列步驟適用于 24 孔板培養(yǎng)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞，至于其 他培養(yǎng)材料，請(qǐng)參考轉(zhuǎn)染規(guī)模調(diào)整，所有數(shù)量和體積均是按孔計(jì)算。大部分細(xì)胞系所使用的 DNA（μg）與 LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent（μL）的比值為 1: 2 到 1: 3， 轉(zhuǎn)染高密度細(xì)胞可獲得高轉(zhuǎn)染效率、高表達(dá)水平和低細(xì)胞毒 性。優(yōu)化轉(zhuǎn)染是必需的（見優(yōu)化質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)染）。 

A. 貼壁細(xì)胞：轉(zhuǎn)染前一天每孔 0.5-2×105個(gè)細(xì)胞接種于 500 μL 不含抗生素的培養(yǎng)基中，在轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞可長至 70-90%匯合度。

懸浮細(xì)胞：在配制轉(zhuǎn)染液前每孔 4-8×105 個(gè)細(xì)胞接種于 500 μL 不含抗生素的培養(yǎng)基中。 

B. 轉(zhuǎn)染液制備，每孔細(xì)胞用量如下：

     a. 用 50 μL Opti-MEM 低血清培養(yǎng)基（或者其他無血 清培基） 稀釋質(zhì)粒 DNA，輕輕混勻。 

     b. 使用前輕輕搖勻 LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent ， 然 后 取 適 量 LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 在 50 μL Opti-MEM 培養(yǎng)基中稀釋，室溫孵育 5 min。 注意：請(qǐng)?jiān)?25 min 內(nèi)進(jìn)行下一步操作。 

     c. 將前兩步所稀釋的 DNA 和 LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 混合（使總體積為 100 μL），輕輕混勻， 室溫放置 20 min（溶液可出現(xiàn)濁）。

     注意：轉(zhuǎn)染復(fù)合物常溫下可在 6 h 內(nèi)保持穩(wěn)定。

C. 在每孔細(xì)胞中加入 100 μL 轉(zhuǎn)染液，輕輕搖勻。 

D. 37℃培養(yǎng) 18-48 h 后檢測(cè)基因表達(dá)，轉(zhuǎn)染 4-6 h 后可更換 培養(yǎng)基。 對(duì)于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，在轉(zhuǎn)染 24 h 后以 1: 10 稀釋接種于新鮮培養(yǎng)基中，第二天可加入選擇培養(yǎng)基。

優(yōu)化 DNA 轉(zhuǎn)染 

     可通過改變細(xì)胞密度、質(zhì)粒 DNA 密度和 LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 濃度以優(yōu)化轉(zhuǎn)染。要保證細(xì)胞融合 在 90% 以 上 ， DNA (μg): LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent (μL)可在 1: 0.5 到 1: 5 之間進(jìn)行調(diào)整。

2. RNAi 或 siRNA 轉(zhuǎn)染 

     下列步驟適用于 24 孔板培養(yǎng)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞，至于其 他培養(yǎng)材料，請(qǐng)參考轉(zhuǎn)染規(guī)模調(diào)整，所有數(shù)量和體積均是按 每孔計(jì)算。

A. 轉(zhuǎn)染前一日，將細(xì)胞接種于 500 μL 不含抗生素的培養(yǎng)基 中，使其在轉(zhuǎn)染時(shí)長至 30-50%匯合度。 

B. 轉(zhuǎn)染液制備，每孔細(xì)胞用量如下：

     a. 用 50 μL Opti-MEM 低血清培養(yǎng)基（或者其他無血 清基）稀釋 20 pmol siRNA（轉(zhuǎn)染時(shí) siRNA 終濃度為 33 nM）， 輕輕混勻。

     b. 使用前輕輕搖勻 LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent ， 然 后 取 1 μL LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 在 50 μL Opti-ME I 培養(yǎng)基中稀釋，室溫孵育 5 min。 

     注意：請(qǐng)?jiān)?25 min 內(nèi)進(jìn)行下一步操作。 

     c. 將前兩步所稀釋的 RNA 和 LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 混合（使總體積為 100 μL），輕輕混勻， 室溫放置 20 min（溶液可出現(xiàn)渾濁）。

C. 在每孔細(xì)胞中加入 100 μL 轉(zhuǎn)染液，輕輕搖勻。37℃培養(yǎng) 24-96 h 后檢測(cè)基因表達(dá)，轉(zhuǎn)染 4-6 h 后可更換培養(yǎng)基。 

siRNA 轉(zhuǎn)染優(yōu)化

     可 調(diào) 整 siRNA 與 LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 的用量以優(yōu)化轉(zhuǎn)染，在 24 孔板，siRNA 可在 10-50pmol 之間調(diào)整，LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 可在 0.5-1.5 μL 之間調(diào)整，在增加細(xì)胞密度時(shí)也應(yīng)優(yōu)化轉(zhuǎn)染 劑量。

轉(zhuǎn)染規(guī)模調(diào)整 

不同培養(yǎng)材料轉(zhuǎn)染液、細(xì)胞和培養(yǎng)基的用量按照培養(yǎng) 材料面積換算。在 96 孔板細(xì)胞高通量自動(dòng)分析系統(tǒng)，推薦 每孔使用 50 μL 轉(zhuǎn)染液。

注意：在 96 孔板，可將細(xì)胞直接接種于轉(zhuǎn)染液中以實(shí) 現(xiàn)快速轉(zhuǎn)染，直接在培養(yǎng)板中配制轉(zhuǎn)染液 100μL，直接將細(xì)胞加入培養(yǎng)板中，其密度為上述方法的 2 倍，細(xì)胞在轉(zhuǎn)染液中可正常貼壁。

注意事項(xiàng)

1. 使用高純度的DNA或RNA有助于獲得較高的轉(zhuǎn)染效率。 

2. 轉(zhuǎn)染前細(xì)胞必須處于良好的生長狀態(tài)。 

3. 需自備不含抗生素的無血清培養(yǎng)液或 Opti-MEM?培養(yǎng) 液或普通的 DMEM 培養(yǎng)液。

4. LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 轉(zhuǎn)染試劑不能 vortex 或離心，宜緩慢晃動(dòng)混勻。 

5. LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 轉(zhuǎn)染試劑使用 后請(qǐng)立即蓋好蓋子，避免長時(shí)間暴露在空氣中，影響轉(zhuǎn)染效 率。

6. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。